宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)實驗操作細則：

一、 樣本處理：
1.   取 100ul 待檢樣本至 1.5ml 干凈的離心管中，加入 10ul 5M  NaCl  溶液，用渦旋      振 蕩器充分震蕩 10 秒；
2.   加入 10ul 蛋白酶 K，在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒；
3.   配制新鮮的裂解液，其組成為： 130ul  裂解液/100ul  樣本， 9ul  肝糖原/100  樣本， 0.2ul tRNA/100ul 樣本，充分混勻以制成新鮮配制的裂解液；
4.  將 139ul 新鮮配制的裂解液加入到樣本管中， 然后用渦旋振蕩器充分震蕩 10 秒， 取出短 暫快速離心 5 秒，然后放置在 56oC 孵育 30 分鐘；
二、 DNA 捕獲：
1.     將磁珠充分渦旋振蕩以完全重懸；
2.     將樣本管從孵育器中取出， 進行簡短的離心，將液體收集到管底，然后加入完全重懸的 磁珠 60ul 和 230ul 結合液，在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒； (注意： 在加入磁珠時， 需經 常振蕩重懸磁珠， 以保證吸取時磁珠的均勻性。建議每加 3-4 組樣本后， 重懸磁珠后再進行 后續樣本的添加)
3.     將震蕩后的樣本管，置于旋轉混勻器或渦旋振蕩器上 10 分鐘以進行磁珠捕獲；
4.     將樣本管從旋轉混勻器上取下，在 10000g 的條件下離心 1 分鐘使磁珠充分聚集；
5.     將離心后的樣本管置于磁力架上， 待溶液完全澄清后， 用槍頭小心移去上清(注： 避免 槍頭攪動磁珠，使得磁珠同上清一起被除去從而影響得率)；
三、 洗滌：
1.     樣本管移去上清后，不必將樣本管從磁力架上取下，直接加入 400ul 洗滌液；
2.     待溶液完全澄清后，磁珠完全分離，用槍頭小心移去上清；
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3.     保持樣本管在磁力架上， 加入 400ul 洗滌液， 待溶液澄清， 磁珠完全分離后， 用槍頭小 心移去上清；
4.     將樣本管從磁力架上取下， 于 10000g 的條件下離心 30 秒，使得殘留的洗滌液完全聚集 到管底；
5.     將樣本管置于磁力架上，待磁珠完全分離后，用 10ul 槍頭小心移除殘留的液體；
6.     將樣本管從磁力架上取下，置于 70oC 金屬浴中，放置 4 分鐘， 除去殘留的乙醇(注： 若干燥不夠， 殘留的乙醇會影響后續的定量檢測反應)；待磁珠團出現裂紋時，將樣本管從 金屬浴中取出進行 DNA 洗脫；
四、 DNA 洗脫：
1.     沿著樣本管的管壁加入 50- 100ul 洗脫液，用 100ul 的槍頭反復吹吸，以完全重懸磁珠；
2.     將樣本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分鐘；
3.     將樣本管從孵育器中取出，于 20000g 離心 2 分鐘，然后至于磁力架上，待磁珠完全分 離后，用 10ul 槍頭小心將上清液體轉移至新的干凈的離心管中；
4.      為了避免吸入磁珠，在離心管中還剩余少量液體時，將其于 20000g 離心 2 分鐘，然后 至于磁力架上以吸出剩余的液體。