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傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

細(xì)胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人細(xì)胞；PLC/PRF/5-Cas9-707

形態(tài)特性: 上皮樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使PLC/PRF/5細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單，經(jīng)WesternBlotting驗(yàn)證該可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS；400ug/mlG418

傳代方法: 1:2~1:6傳代；2~3天換液1次。

傳代情況:

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

注意事項(xiàng)：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

PABA(Mousepara-aminobenzoicacid)ELISAKit小鼠對(duì)氨基苯甲酸  規(guī)格：50mg  

OVAsIgG(HumanovalbuminspecificIgG)ELISAKit人卵清蛋白特異性IgG  規(guī)格：10mg  

RANKLELISAKit大鼠核因子κB受體活化因子配基  規(guī)格：1g  

CAM-ab(Humananti-calmodulinspecificantibody)ELISAKit人抗鈣調(diào)素特異抗體  規(guī)格：50mg  

TpPELISAKit大鼠前體蛋白  規(guī)格：20mg  

hs-CRP(MousehighsensitivityC-ReactiveProtein)ELISAKit小鼠超敏C反應(yīng)蛋白  規(guī)格：19.5g/300ml  

Beta2-GP1IgA/G/M(MouseBeta2-glycoprotein1antibodyIgA/G/M)ELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M  規(guī)格：20mg  

INH-BELISAKit大鼠抑制素B  規(guī)格：300mg  

THAA(Humanthyroidhormoneautoantibodies)ELISAKit人甲狀腺非肽激素抗體  規(guī)格：100mg  

LAT(MouseLinkerforactivationofTcell)ELISAKit小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白  規(guī)格：100mg  

SCA(Humansteroidproducingcellautoantibody)ELISAKit人抗類固醇生成細(xì)胞抗體  規(guī)格：0.5g  

ISR-BetaELISAKit大鼠胰島素受體β  規(guī)格：100mg  

GHbA1cELISAKit大鼠A1c  規(guī)格：0.2ml  

GS-ANA(Humangranulocytespecificantinuclearantibody)ELISAKit人粒細(xì)胞特異性抗核抗體  規(guī)格：1000mg  

EMAb(MouseEndometriumAntibody)ELISAKit小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體  規(guī)格：100mg  
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人細(xì)胞；PLC/PRF/5-Cas9-707價(jià)格對(duì)香豆酸501-98-4中文別名：對(duì)羥基肉桂酸，3-（4-羥基苯基）-2丙烯酸  

英文名：p-Coumaric acid  

英文別名：p-Hydroxycinnamic acid  

CAS登錄號(hào)：501-98-4

分子式：C9H8O3

分子量：164.16

分子結(jié)構(gòu)：

外觀：白色針狀結(jié)晶

規(guī)格：20 mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。

提取來源：蓼科植物天蕎麥(Fagopyrum cymosum Meisn. )。

溶解性：溶于熱醚，熱乙醇中，微溶于苯，不溶于，不溶于水。

熔點(diǎn)：218-221℃

：該化合物對(duì)金黃色葡萄球菌、、大腸桿菌及綠膿桿菌均有不同程度的；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，本品還有作用。

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年