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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

猴頭菇注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

雙色牛肝菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

長雙歧桿菌*亞種拉丁屬名: Bifidobacterium longum subsp. infantis

大腸埃希氏菌拉丁屬名: Escherichia  coli

擬莖點霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

北見微桿菌拉丁屬名: Microbacterium kitamiense

球毛殼菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

栗疫菌拉丁屬名: Cryphonectria parasitica

細極鏈格孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

胡椒樹青霉拉丁屬名: Penicillium molle

紅霉素擬無枝酸菌用途: 益生菌

桑葉刺盤孢拉丁屬名: Colletotrichum morifolium Hara

金黃殼囊孢菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

嗜熱嗜脂肪地芽孢桿菌拉丁屬名: Geobacillus stearothermophilus

微黃八疊球菌拉丁屬名: Sarcina subflava Ravenel
虎源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒供應商ALF 英文名稱： 通用轉錄因子IIA樣因子 0.1ml

Anti-APP695/770 /FITC 熒光素標記淀粉樣肽前體蛋白IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ATGA/TGAB ELISA Kit 大鼠抗甲狀腺球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Acetyl CoA Carboxylase/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、猴、乙酰輔酶A羧化酶IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FIBCD1 含纖維蛋白原C結構域蛋白1 規(guī)格 0.2ml

NGF- Beta(Human Nerve growth factor- Beta) ELISA kit 人的神經(jīng)生長因子-β 96T

Mtp53(N235K N239Y) 英文名稱： 突變型P53 0.1ml

CD5 英文名稱： CD5 0.1ml

Anti-MCSF Receptor 巨噬細胞集落刺激因子受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

MBP/MBL(Human Mannma binding protein/mannan binding lectin) ELISA Kit 人甘露糖結合蛋白/甘露糖結合凝集素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-P-selectin/CD62p P選擇素Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HCCR2/LETMD1 原癌基因2 規(guī)格 0.2ml

GGT(Human gamma glutamyl transpeptidase) ELISA Kit 人γ谷酰轉移酶 96T

PCNA 英文名稱： 增殖細胞核抗原 0.1ml

AVPR2 英文名稱： 精酸加壓素受體2 0.1ml

Anti-Acinus L/S/FITC 熒光素標記腺泡Acinus L/SIgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

C I CP(Mouse cross-linked C-telopeptides of Type I collagen) ELISA Kit 小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CA125/Biotin 生物素標記兔抗人CA125抗原IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DRAK2 DAP凋亡誘導蛋白激酶2 規(guī)格 0.2ml

HSV- II IgG 單純Ⅱ型病毒 IgG(間接法二步法)

MTNR1B 英文名稱： 褪黑素受體1B 0.1ml

CTLA4 英文名稱： 細胞毒性T細胞抗原-4 0.2ml

Anti-Protein A 重組蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

LEP(Human Leptin) ELISA kit 人瘦素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

anti-Integrin alpha E2 整合素alpha E2 Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Kif14 protein 驅動蛋白家族Member14蛋白 規(guī)格 0.2ml

CP(Human cicatricial Pemphigoid) ELISA Kit 人性天皰瘡 96T

PCMT1 英文名稱： 天門冬酸甲基轉移酶PCMT 0.2ml