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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

釀酒酵母CD163 (Cluster of Differentiation 163) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

大腸埃希氏菌CFD (Complement Factor D) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

Acinetobacter toroneriI-TAC (Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant) ELISA Kit拉丁屬名: Acinetobacter toroneri

蠟狀芽孢桿菌ENG (Endoglin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

瓜類炭疽刺盤孢菌*FABP1 (Fatty Acid Binding Protein 1, Liver) ELISA Kit拉丁屬名: Colletotrichum orbiculare

湘坪鏈霉菌FABP4 (Fatty Acid Binding Protein 4, Adipocyte) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces xiangpingensis

鹽地桿菌IL-1R2 (Interleukin 1 Receptor Type II) ELISA Kit拉丁屬名: Salinibacterium  sp.

胡椒枯萎病IL-1R1 (Interleukin 1 Receptor Type I) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

短小芽孢桿菌MCSF (Macrophage Colony Stimulating Factor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  pumilus

嗜鹽噬冷菌IL-22 (Interleukin 22) ELISA Kit拉丁屬名: Algoriphagus  halophilus

薛瓦酵母PL (Pancreatic Lipase) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  chevalieri

小孢擬盤多毛孢IL-12 p35 (Interleukin 12 p35) ELISA Kit拉丁屬名: Pestalotiopsis microspora

水稻節桿菌CALD (Caldesmon) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter oryzae

膠孢FTH (Ferritin, Heavy Polypeptide) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母IL-19 (Interleukin 19) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae
絲狀網尾線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒供應商SCCA/SERPINB4  絲氨酸蛋白酶抑制劑B4抗體(抗原)羥基積雪草苷Madecassoside中藥標準品  分 子 式: C48H78O20 分 子 量: 975.120920000001

SULT1A1  芳基磺基轉移酶1抗體矮陀陀酰胺堿 ABenzamide, N-[(*,20S)-20-(dimethylamino)-4-oxopregn-2-en-3-yl]-對照藥材 分 子 式: C30H42N2O2 分 子 量: 462.66668

TKTL1  酮基移換酶樣蛋白1抗體牛膝甾酮inokosterone中藥標準品  分 子 式: C27H44O7 分 子 量: 480.63406

PRSS10/TMPRSS2  絲氨酸蛋白酶10抗體大麻色原烯2H-1-Benzopyran-5-ol,2-methyl-2-(4-methyl-3-penten-1-yl)-7-pentyl-對照藥材 分 子 式: C21H30O2 分 子 量: 314.4617

TMPRSS4  膜型絲氨酸蛋白酶2抗體美洲茶酸3'H-Cyclopenta[3,4]-18-norandrost-3-ene-3',13-dicarboxylicacid, tetrahydro-4'-hydroxy-4,5',5',9-tetramethyl-15-(1-methylethenyl)-, (3b,3'b,4a,4'a,5b,8a,9b,10a,13a,14b,15b)-對照藥材 分 子 式: C30H46O5 分 子 量: 486.68324

UEVLD/UEV3  泛素結合酶E2樣蛋白抗體HEPES緩沖液(10×HMF,無鎂)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

UPP1/Uridine Phosphorylase 1  尿嘧啶核苷磷酸化酶1抗體Perenyi's脫鈣液標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: