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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

德沃斯氏菌ITGB3 (Integrin Beta 3) ELISA Kit拉丁屬名: Devosia sp.

Burkholderia metallica Vanlaere et al.MIP-3β(Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit 用途: 固氮。

泡盛曲霉MIP-5 (Macrophage Inflammatory Protein 5) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus awamori

枯草芽孢桿菌MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

假單胞菌H4 (Histone H4) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas sp.

大莖點菌MHCI/H-2Ⅰ(Major Histocompatibility ComplexⅠ) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

仁果叢梗孢MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ(Major Histocompatibility Complex-Ⅱ) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ(Major Histocompatibility Complex-Ⅲ) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

美澳型核果褐腐病菌HAT (Histone Acetyltransferase) ELISA Kit拉丁屬名: Monilinia fructicola

橄欖色盤多毛孢CA15-3 (Carbohydrate Antigen 15-3) ELISA Kit拉丁屬名: Pestalotia olivacea

黑曲霉MMP-1 (Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

白地霉MMP-2 (Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit拉丁屬名: Geotrichum  candidum

岸海桿狀菌MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit拉丁屬名: Marinobacter litoralis

MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

腸桿菌屬MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit 拉丁屬名: Enterobacter  sp.
犬諾瓦克病毒探針法熒光定量PCR試劑盒說明書PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma)  過氧化酶活化增生受體γ（抗原）哈巴俄苷Harpagosid中藥標準品  分 子 式: C24H30O11 分 子 量: 494.4884

PP2Ac  蛋白磷酸酶4(抗原)7－羥基馬兜鈴酸A7-Hydroxyaristolochic acid A中藥標準品  分 子 式: C13H12N4Os 分 子 量: 272.32558

Runx3  一種新發現的基因(抗原)石杉堿丙5,9-Methanocycloocta[b]pyridin-2(1H)-one,5-amino-11-ethenyl-5,6,9,10-tetrahydro-7-methyl-, (5R,9R,11R)- (9CI)化學標準品 分 子 式: C15H18N2O 分 子 量:

RRAD (Ras-related associated with diabetes )  RRAD(多肽抗原)大果桉醛 A5--1R--1--11S-7R--7-Hydroxy-3-3-7-11-tetramethyltricyclo-6-3-0-0-2-4-undec-11-yl--3-methylbutyl--2-4-6-trihydroxybenzene-1-3-dicarbaldehyde對照藥材 分 子 式: C28H40O6 分 子 量: 472.6136

SDF-1/CXCL12 (stromal cell derived factor-1)  基質細胞衍生因子-1(抗原)鼠李糖L-rhamnose monohydrate中藥標準品  分 子 式: C6H12O5.H2O 分 子 量: 182.17

shank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1)  shank1多肽抗原7-乙基喜樹堿(S)-4,11-Diethyl-4-hydroxy-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione中藥標準品  分 子 式: C22H20N2O4 分 子 量: 376.4052

slc22A17 (solute carrier famili 22)  溶質轉運蛋白家族22成員17(多肽抗原)款冬酮2-Pentenoic acid,3-methyl-,(1S,3aR,5R,7S,7aS)-1-[(1R)-1-(acetyloxy)ethyl]octahydro-4-methylene-7-(1-methylethyl)-2-oxo-1H-inden-5-ylester, (2E)-化學標準品 分 子 式: C23H34O5 分 子 量: 390.51306