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人舌磷癌細(xì)胞CAL33實(shí)驗(yàn)操作步驟
發(fā)表時(shí)間：2024-12-16
人舌磷癌細(xì)胞CAL33實(shí)驗(yàn)操作步驟續(xù)寫如下：
在完成細(xì)胞培養(yǎng)的基本準(zhǔn)備后，接下來進(jìn)行CAL33細(xì)胞的傳代操作。首先，將培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基輕輕吸出，注意避免吸到細(xì)胞層，以防細(xì)胞損失。然后，向培養(yǎng)瓶中加入適量的無菌磷酸鹽緩沖液（PBS），輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，洗滌細(xì)胞表面，以去除殘留的血清和代謝產(chǎn)物。再次吸出PBS后，加入適量的胰蛋白酶-EDTA溶液，覆蓋細(xì)胞層，輕輕搖晃使胰蛋白酶均勻分布。
將培養(yǎng)瓶置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中，靜置約3-5分鐘，或直至在顯微鏡下觀察到細(xì)胞開始變圓并脫離培養(yǎng)瓶壁。此時(shí)，迅速向培養(yǎng)瓶中加入等體積的完全培養(yǎng)基，以中和胰蛋白酶的活性。使用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞完全分散成單個(gè)細(xì)胞。
接下來，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將細(xì)胞懸液按一定比例分配到新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充完全培養(yǎng)基至適當(dāng)體積。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布。最后，將培養(yǎng)瓶放回37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，定期觀察細(xì)胞生長情況，并根據(jù)需要更換培養(yǎng)基。
在CAL33細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)過程中，還需注意無菌操作，避免細(xì)胞污染。同時(shí)，要記錄細(xì)胞傳代的次數(shù)和時(shí)間，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析和數(shù)據(jù)整理。此外，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌€可以對CAL33細(xì)胞進(jìn)行基因操作、藥物處理或細(xì)胞功能檢測等實(shí)驗(yàn)。
在完成細(xì)胞培養(yǎng)的基本準(zhǔn)備后，接下來進(jìn)行CAL33細(xì)胞的傳代操作。首先，將培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基輕輕吸出，注意避免吸到細(xì)胞層，以防細(xì)胞損失。然后，向培養(yǎng)瓶中加入適量的無菌磷酸鹽緩沖液（PBS），輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，洗滌細(xì)胞表面，以去除殘留的血清和代謝產(chǎn)物。再次吸出PBS后，加入適量的胰蛋白酶-EDTA溶液，覆蓋細(xì)胞層，輕輕搖晃使胰蛋白酶均勻分布。
將培養(yǎng)瓶置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中，靜置約3-5分鐘，或直至在顯微鏡下觀察到細(xì)胞開始變圓并脫離培養(yǎng)瓶壁。此時(shí)，迅速向培養(yǎng)瓶中加入等體積的完全培養(yǎng)基，以中和胰蛋白酶的活性。使用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞完全分散成單個(gè)細(xì)胞。
接下來，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將細(xì)胞懸液按一定比例分配到新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充完全培養(yǎng)基至適當(dāng)體積。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布。最后，將培養(yǎng)瓶放回37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，定期觀察細(xì)胞生長情況，并根據(jù)需要更換培養(yǎng)基。
在CAL33細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)過程中，還需注意無菌操作，避免細(xì)胞污染。同時(shí)，要記錄細(xì)胞傳代的次數(shù)和時(shí)間，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析和數(shù)據(jù)整理。此外，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌€可以對CAL33細(xì)胞進(jìn)行基因操作、藥物處理或細(xì)胞功能檢測等實(shí)驗(yàn)。
