瓜類細(xì)菌性果斑病菌探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

 斯氏李斯特氏菌
 側(cè)孢短芽孢桿菌
 乳酸乳球菌乳亞種
 牙齦卟啉單胞菌
 菩提奇異球菌
 干燥棒桿菌
 屎腸球菌(屎鏈球菌)
 具核梭桿菌多形亞種
 脆弱擬桿菌
 齒雙歧桿菌
 粘性放線菌
 植物乳桿菌植物亞種
 遲緩愛德華氏菌
 哈氏弧菌
 Hydrotalea flava
 萎縮芽孢桿菌
 血鏈球菌
 醋酸醋桿菌
 伊氏李斯特氏菌
 英諾克李斯特氏菌
 紅曲霉
 不動(dòng)桿菌
 食酸菌
 短波單胞菌
 多頭霉
 掘氏疫霉
 煙草疫霉
 副球菌
 溶藻細(xì)菌
 假單胞菌
 芽孢桿菌
 大腸桿菌
 酸土脂環(huán)芽孢桿菌